¿Cuál es la correlación entre la densidad óptica corregida y el número de células?
Escrito por David Dunning ; última actualización: February 01, 2018
La densidad óptica (una medida del grado en el que una sustancia puede transmitir la luz) a menudo se usa para medir la concentración de células o partículas que se encuentran dispersas, pero no disueltas, en un fluido. La densidad óptica corregida de este tipo de mezcla, conocida como suspensión, es directamente proporcional a la concentración, densidad o número de células dispersas en ella.
Ley de Beer-Lambert
La ley de Beer-Lambert, que afirma que la absorbancia es proporcional o tiene una relación lineal con la concentración de la especie absorbente, solamente es verdadera para densidades ópticas por debajo de 0,4. Sin embargo las muestras con densidades ópticas superiores a 0,4 pueden ser diluidas por un factor de dilución definido y sus densidades ópticas pueden ser medidas. Si los valores medidos se dividen entre el favor de dilución para producir la densidad óptica corregida, este nuevo valor es proporcional al número de células en la muestra.
Espectrofotómetro
La densidad óptica es medida por un instrumento conocido como espectrofotómetro que compara el brillo de la luz emitida desde dos fuentes, una de las cuales tiene ciertas características estándar. Cuando la luz pasa a través de una suspensión celular, la luz es dispersada por las células de manera que una menor parte de ella lega a una celda fotoeléctrica (un dispositivo electrónico cuya salida eléctrica varía de acuerdo a la fuerza de la luz que incide sobre él) dentro del espectrofotómetro. Por lo tanto, mientras más alto sea el número de células en la suspensión más débil será la salida eléctrica de la celda fotoeléctrica y viceversa.
Densidad óptica y corrección
A densidades ópticas por encima de 0,4, los grados en los que las células pueden ser ensombrecidas por otras células o la luz reflejada muchas veces es apreciable. A densidades ópticas mayores la densidad óptica no corregida de las suspensiones celulares ya no es directamente proporcional al número de células. Sin embargo, la densidad óptica no corregida de las suspensiones celulares diluidas es casi proporcional a sus densidades relativas conocidas con precisión (la proporción de sus densidades con respecto a una sustancia de referencia, como el agua) por lo que es una hipótesis de trabajo razonable que la densidad óptica no corregida de una suspensión celular altamente diluida es, de hecho, su densidad óptica real.
Densidad óptica relativa
Al multiplicar el valor de densidad relativa de cualquier suspensión celular por el valor de densidad óptica básico calculado con la suspensión celular altamente diluida, es posible obtener la densidad óptica corregida. Sin embargo para hacer la medición tan precisa como sea posible, el valor de densidad óptica básico debe obtenerse a partir de múltiples lecturas del espectrofotómetro.
