¿Cuál es la función de una solución buffer Tris en la extracción de ADN?
Escrito por Dr. Alex Tan ; última actualización: February 01, 2018
La solución Tris, o tri (hidroximetil) aminometano, es una solución buffer biológica común que se utiliza en todo el proceso de extracción de ADN ya que este es sensible al pH de cualquier tipo de fuente durante dicho proceso. La solución Tris se utiliza durante la lisis celular, la eliminación y la precipitación de componentes celulares no deseados para mantener un pH estable. Además, desempeña un papel particularmente importante en la lisis celular.
La solución Tris como buffer
Como el pH puede influir y ser influido por un número de factores celulares, mantener un pH estable es esencial para la ciencia experimental. Los buffers biológicos, como la solución Tris, son importantes porque pueden mantener un pH estable a pesar de las influencias que podrían modificar el pH. El Tri (hidroximetil) aminometano, con un pKa de 8,1, es una solución buffer eficaz con un pH de entre 7 y 9. Debido a su rango neutro, la solución Tris es una solución buffer comúnmente utilizada en los laboratorios biológicos. Sin embargo, la solución reguladora Tris es sensible a la temperatura y debe ser utilizada en la temperatura a la cual se logró el pH original para evitar inexactitudes.
Lisis de las células
La lisis, o ruptura de las células, es el primer paso para la extracción del ADN. Esto se logra mediante el uso de una solución buffer que contenga solución Tris y EDTA (Ácido Etilendiaminotetraacético). El EDTA se une a cationes divalentes tales como el calcio y el magnesio. Dado que estos iones ayudan a mantener la integridad de la membrana celular, la eliminación de estos con EDTA desestabiliza la membrana. La solución Tris es el principal componente buffer; su función principal es la de mantener el pH del buffer en un punto estable, por lo general 8,0. Además, la solución Tris interactúa con el LPS (lipopolisacárido) de la membrana, lo cual sirve para desestabilizar la membrana aún más.
La solución Tris Protege al ADN de los cambios en el pH
Cuando las células se rompen, su ADN y contenido se vierten en el buffer. A menudo se incluyen además, la ARNasa (destruye el ARN), las proteasas (destruye las proteínas), y el SDS (dodecilsulfato sódico, solubiliza los fragmentos de membrana). En conjunto, este caldo de contenido celular y fragmentos de ARN y proteínas puede tener un gran impacto en el pH de la solución. Debido a que el ADN es sensible al pH, es importante que la solución Tris regule el caldo y mantenga el pH en un valor fijo.
Precipitación del ADN
En la etapa final de la extracción de ADN, se extrae el propio ADN de la solución. En este punto, el ADN es soluble en el buffer. Para extraer el ADN de la solución, este se hace insoluble mediante la adición de etanol o isopropanol (alcohol isopropílico). Al hacer esto, el ADN se hace visible en la solución como una sustancia blanca filiforme. A pesar de que cuando el ADN es insoluble se lo puede aislar de los componentes celulares restantes, no es "utilizable". Después de aislarlo, se elimina el alcohol, y el ADN debe ser devuelto a una solución buffer biológica, tal como la solución Tris, para ser utilizado.
Hazlo tú mismo
Aunque la extracción de ADN se hace comúnmente en los laboratorios de investigación, utilizando generalmente uno de los kits disponibles en el mercado, cualquier persona puede hacer la extracción de ADN en casa utilizando elementos comunes del hogar y guisantes o espinaca. En este caso, ni la solución Tris ni ninguna otra solución buffer biológica, está presente para proteger al ADN de los cambios en el pH. Sin embargo, es una forma visual de ayudar a los estudiantes a conectarse con el ADN celular.
