Métodos de fraccionamiento celular

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Los biólogos a menudo necesitan purificar componentes específicos de células o de proteínas a partir de muestras de tejido como parte de un experimento. El proceso por el cual separan las células de sus componentes se llama fraccionamiento celular. Hay varios pasos para este proceso.

Homogenización

En primer lugar las células deben romperse para abrirse. Existe una variedad de métodos diferentes; el método elegido depende del tipo de experimento y del tipo de muestra (cultivo bacteriano o una muestra de tejido de mamífero, por ejemplo). Los detergentes como SDS o Triton X alteran la membrana celular de modo que el contenido pueda fluir hacia fuera. Someter las células a las ondas de ultrasonido o a sonicación también las romperá, al igual que la agitación en presencia de metal o de perlas de vidrio. Las licuadoras pueden trabajar con muestras de tejido pero no funcionarán con bacterias u otros microorganismos.

Filtración

Las células se homogeneizan siempre en una solución tamponada la cual ayuda a estabilizar el pH y, por lo tanto, evita daños en el contenido de las células durante la extracción. Ocasionalmente, el homogeneizado resultante se debe filtrar para eliminar el tejido conjuntivo o de otros elementos indeseables. Dependiendo de la naturaleza del contaminante, esto puede ser tan simple como verter el homogeneizado a través de gasa y recoger el filtrado en el otro lado. En todos los tiempos después de la homogeneización, el homogeneizado se debe mantener frío para minimizar la actividad de las proteasas, enzimas que desmenuzan proteínas. A veces también se añaden inhibidores de proteasa.

Centrifugación

A continuación, el homogeneizado se transfiere a un tubo de centrifugación y se coloca en una centrifugadora. Este dispositivo contiene un rotor que gira a alta velocidad y que agita el contenido de cada uno de los tubos hacia fuera, en la misma forma que la conducción a la izquierda alrededor de una curva cerrada que te arroja hacia la puerta del lado del pasajero. Intensifica la densidad de los componentes del sedimento homogeneizado antes y a velocidades más bajas que la densidad de los componentes, de modo que éstos pueden ser separados y recolectados sobre la base de la densidad.

Precipitación con sulfato amonio

A veces, los biólogos necesitan recoger orgánulos específicos del homogeneizado para estudio exhaustivo. Si es así, se utilizará la centrifugación repetida para aislar la fracción que contiene el orgánulo que necesitan. Si, por otro lado, están tratando de aislar una proteína específica, se puede utilizar una técnica llamada precipitación con sulfato de amonio. La adición de sal con sulfato de amonio, que aumenta la fuerza iónica de la solución, hace que algunas proteínas de la centrifugación se precipiten. Este proceso reduce la concentración de proteína en el homogeneizado y hará que sea más fácil purificar la proteína de interés más adelante.